升桖家红枣提取液药代动力学项目报告（规格：每100 mL含cAMP 38 mg ，即0.38 mgmL）

上海飞凡检测认证集团有限公司

检 测 报 告

委托单位	北京康舒元商贸有限公司	地址	北京市丰台区园博园南路渡业 大厦708室
样品名称	升桖家红枣提取液（加强型）	样品颜色状态	液体
生产单位	/	生产单位地址	/
样品来源	/	样品数量	/
样品规格和批号	规格：120ml(20ml*6) 批号：20260401	生产日期	2026-04-21
接样日期	2026-09-28	检测完成日期	2026-10-08
检测依据和方法	竞争法cAMP ELISA（样本5倍稀释）
检测项目	大鼠口服升桖家?红枣提取液药代动力学实验

升桖家?红枣提取液药代动力学项目报告

项目	内容
实验名称	大鼠口服升桖家?红枣提取液药代动力学实验
供试品	升桖家?红枣提取液（规格：每100 mL含cAMP 38 mg ，即0.38 mg/mL）
给药途径与剂量	灌胃（ig），单次灌胃5 mL/只（cAMP 1.9 mg/只，约7.6～9.5 mg/kg）
实验动物	SPF级SD大鼠，雄性，体重180～220 g ，共6只（n=6）
采血时间点	0 min 、5 min 、15 min 、30 min 、1 h 、2 h 、4 h 、8 h 、12 h
检测方法	竞争法cAMP ELISA（样本5倍稀释），酶标分析仪Infinite F50读取OD值

1  实验目的

观察大鼠单次灌胃给予含环磷酸腺苷（cAMP ，cyclic adenosine monophosphate） 口服液后，血浆中cA MP浓度随时间的动态变化，获得各时间点血药浓度数据，绘制平均血药浓度-时间曲线（药时曲线），并计算主要药代动力学参数，评价该口服液在大鼠体内的吸收、分布与消除特征，为后续处方与临床前评价提供依据。

2  实验原理

2.1  竞争ELISA定量原理

血浆cAMP含量采用竞争法酶联免疫吸附试验（ELISA）定量。试剂盒微孔板上包被有限量的cAMP抗体结合位点，反应体系中标准品/样本中的cAMP与酶标cAMP共同竞争有限的结合位点；孵育洗涤后加入底物显色，酶标物的结合量与cAMP浓度呈负相关，故吸光度（OD值）随cAMP浓度升高而降低。。

2.2  内源性本底校正原理

大鼠血浆中存在内源性cAMP ，且个体间存在差异。为评价口服补充的外源性cAMP在体内的动态变化 , 以给药前0 min采血实测浓度作为每只动物自身的内源性本底基线，给药后各时间点净增加浓度＝实测血浆cAMP浓度?同只动物0 min本底浓度；以净浓度绘制药时曲线并计算药代动力学参数，以排除内源性水平个体差异的干扰。

3  实验仪器与试剂厂家

3.1  主要仪器

表2  主要实验仪器

仪器名称	厂家
多功能酶标仪（酶标分析仪）	Tecan
高速冷冻离心机	Eppendorf
电子天平	梅特勒 - 托利多
恒温水浴	上海一恒

3.2  试剂与耗材

表3  试剂与耗材

名称	厂家/来源
环磷酸腺苷（cAMP  ) ELISA检测试剂盒	上海东迁生物
升桖家?红枣提取液	客户提供

4  实验方法

4.1  实验动物

选用SPF级健康SD大鼠6只（n=6），雄性，体重180～220 g 。动物于屏障环境适应性饲养3天后开始实验。

4.2  供试品与给药

供试品为升桖家?红枣提取液，制剂浓度0.38 mg/mL（每100 mL含cAMP 38 mg）。实验前动物禁食约12 h（过夜禁食）， 自由饮水；给药前逐只称重、编号，按5 mL/只固定体积单次灌胃，每只给药量为5 mL×0.38 mg/mL ＝1.9 mg/只（按体重折算约7.6～9.5 mg/kg）；灌胃后4 h恢复喂食。

4.3  采血时间点与血样处理

0 min为给药前即刻采血，用于测定内源性cAMP本底浓度，为强制必采时间点。采用眼眶后静脉丛采

血；每点采集全血约0.20～0.25 mL ，置EDTA-K2抗凝管中轻柔混匀后立即冰浴；血样于4℃、3500～4 000 r/min离心10 min分离血浆，转移至预标记EP管，?80℃保存待测。每只动物9个时间点累计采血量约2.0～2.2 mL（占200 g大鼠总血量15%以内），采血过程中可视情况腹腔补充等量生理盐水。

4.4  血浆cAMP浓度测定

血浆cAMP浓度采用商业化环磷酸腺苷（cAMP）ELISA检测试剂盒测定，按试剂盒说明书操作：血浆样本稀释5倍后与标准品同板加样孵育，洗涤后加酶标物与底物显色，终止反应后于酶标分析仪（Infini te F50）读取OD值；以四参数Logistic模型拟合标准 曲线，将样本OD值换算为血浆cAMP浓度（nmol/L ) 。

4.5  数据处理与参数计算

（1 ）内源性本底校正：每只动物各时间点净浓度＝实测浓度?该动物0 min本底浓度；

（2）各时间点数据以均值± 标准差 (?x±SD）表示（n=6）；

（3） 以净浓度数据按非房室模型计算Cmax 、Tmax 、AUC0-t（线性梯形法）、AUC0-∞ 、t1/2 、MRT 、CL/F 、Vz/F； λz 由末端4 、8 、12 h三点lnC-t线性回归估算；剂量按1.9 mg/只计，cAMP分子量按32 9.21 g/mol换算；

（4）绘制平均净浓度-时间曲线（线性坐标与半对数坐标）。

5  实验结果

5.1  标准曲线

标准品浓度与实测OD值见表4 ，四参数拟合方程Y=(A?D)/[1+(X/C)^B]+D的拟合参数为：A= 1.5606 ，B = 1.1438 ，C=0.6381 ，D=0.0015 ，相关系数R2=0.9943（X为OD值，Y为浓度，nmol/L）。标准 曲线拟合良好，样本OD值均落在标准 曲线定量范围内；样本浓度按5倍稀释校正后报告。

表4  标准 曲线数据

标准品	S5	S4	S3	S2	S1	S0
浓度（nmol/L）	12	6	3	1.5	0.75	0
OD值	0.0369	0.1630	0.2643	0.3648	0.7396	1.5509

5.2  各时间点血浆cAMP实测浓度

6只大鼠各时间点血浆cAMP实测浓度（nmol/L ，含5倍稀释校正）见表5。

表5  各动物各时间点血浆cAMP实测浓度（nmol/L）

时间点	动物1	动物2	动物3	动物4	动物5	动物6	均值±SD
0 min	4.5703	4.6623	5.2004	4.8075	4.5671	4.3303	4.6897±0.2946
5 min	5.3167	6.4402	6.0768	5.5053	6.3151	5.3323	5.8311±0.5070
15 min	7.7599	6.8651	7.4319	6.9286	7.7177	6.5809	7.2140±0.4906
30 min	12.2675	9.7228	10.1120	10.5278	9.2448	9.5839	10.2431±1.0861
1 h	8.1083	9.2713	9.3576	9.4636	8.6141	9.6183	9.0722±0.5851
2 h	8.4792	7.7801	7.2394	9.5777	7.1107	6.6318	7.8032±1.0748
4 h	7.4131	6.5237	7.2054	7.0409	7.3883	6.9721	7.0906±0.3297
8 h	5.4285	6.9854	6.3864	6.2905	6.4065	6.1348	6.2720±0.5041
12 h	4.7656	5.7893	6.0427	6.0690	5.1379	5.1242	5.4881±0.5500

5.3  本底扣除后的净浓度及均值±SD

以各动物0 min浓度为内源性本底，扣除本底后的净浓度及各时间点均值±SD见表6。

表6 本底扣除后净浓度（nmol/L）及均值±SD

时间点	动物1	动物2	动物3	动物4	动物5	动物6	均值±SD
0 min	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000±0.0000
5 min	0.7464	1.7778	0.8764	0.6977	1.7480	1.0020	1. 1414±0.4931
15 min	3.1896	2.2028	2.2315	2.1210	3.1507	2.2506	2.5244±0.5023
30 min	7.6973	5.0605	4.9116	5.7203	4.6777	5.2537	5.5535±1.1077
1 h	3.5381	4.6090	4.1573	4.6560	4.0469	5.2881	4.3826±0.6038
2 h	3.9089	3.1178	2.0391	4.7702	2.5436	2.3015	3. 1135±1.0503
4 h	2.8428	1.8615	2.0051	2.2334	2.8211	2.6418	2.4009±0.4256
8 h	0.8582	2.3230	1.1860	1.4830	1.8394	1.8045	1.5823±0.5207
12 h	0.1953	1.1270	0.8423	1.2614	0.5708	0.7940	0.7985±0.3847

5.4  主要药代动力学参数

以净浓度数据按非房室模型计算的主要药代动力学参数（每只动物及均值±SD ，n=6）见表7。

表7 主要药代动力学参数（NCA ，净浓度，n=6）

参数	动物1	动物2	动物3	动物4	动物5	动物6	均值±SD
Cmax（nmol/ L）	7.697	5.061	4.912	5.720	4.678	5.288	5.559±1.106
Tmax（h）	0.50	0.50	0.50	0.50	0.50	1.00	0.58±0.20
t1/2（h）	2.07	11.05	6.39	9.71	3.47	4.61	6.22±3.55
AUC0-t（ nm ol·h/L）	24.51	27.84	21.04	28.48	26.44	26.71	25.84±2.72
AUC0-∞（ n mol·h/L）	25.10	45.81	28.80	46.14	29.30	32.00	34.53±9.14
MRT（h）	3.63	13.96	8.94	12.63	5.69	6.85	8.62±4.04
CL/F（L/h）	229.96	125.98	200.36	125.08	196.98	180.37	176.46±42.56
Vz/F（L）	687.03	2008.54	1848.05	1751.66	986.20	1200.31	1413.63±531.61

注：CL/F 、Vz/F为口服表观值（未设iv对照组，F未知），按每只1.9 mg剂量计算；λz 由末端4 、8 、1 2 h三点估算。

5.5  药时曲线

6只大鼠平均血浆cAMP净浓度-时间曲线（均值±SD）见图1（线性坐标）与图2（半对数坐标）。

图1  平均血浆cAMP净浓度-时间曲线（线性坐标，?x±SD ，n=6）

6  实验结果分析

6.1  吸收特征

给药后血浆cAMP浓度上升迅速：5 min即检出净浓度升高（ 1. 14±0.49 nmol/L），15 min升至2.52±0.50 nmol/L ，30 min达到峰值（5.55±1.11 nmol/L）。净浓度Cmax均值5.56±1.11 nmol/L ，Tmax均值0.58±0. 20 h（6只动物中5只于30 min达峰、1只于1h达峰），提示该口服液经胃肠道吸收较快。

6.2  消除特征

达峰后净浓度持续下降：2 h 、4 h 、8 h 、12 h净浓度分别为3. 11±1.05 、2.40±0.43 、1.58±0.52 、0.80±0.3 9 nmol/L ，12 h时净浓度约为峰值的14% ，已基本接近本底水平。末端相消除半衰期t1/2均值6.22±3.55

h ，个体间差异较大（2.07～11.05 h），可能与末端采样点较少（4 、8 、12 h三点）导致λz外推误差，

以及内源性cAMP基线波动有关。

6.3  暴露水平与表观清除

净浓度AUC0-∞均值34.53±9.14 nmol·h/L（按cAMP分子量329.21折算约11.4 μg·h/L），总体暴露量有限 ；口服表观清除率CL/F为176.46±42.56 L/h 、表观分布容积Vz/F为1413.63±531.61 L ，数值明显偏大，

主要反映cAMP口服后生物利用度较低的总体特征。

6.4  药时曲线形态

平均药时曲线在1～2 h出现平台或轻微波动（部分动物1h后浓度有小幅回升或维持），可能反映二次吸收、肠肝循环或内源性cAMP节律性波动，需更大样本量与更密集采样进一步确证。

7  结论

大鼠单次灌胃给予升桖家?红枣提取液（1.9 mg/只）后，血浆cAMP浓度迅速升高并于30 min左右达峰（净浓度Cmax 5.56±1.11 nmol/L ，Tmax 0.58±0.20 h），随后缓慢消除（t1/2约6.2 h ，MRT约8.6 h）， 12 h时基本恢复至本底水平；净浓度AUC0-∞为34.53±9.14 nmol·h/L 。该口服液在大鼠体内吸收较快、

血浆净暴露量有限。

附录A  原始OD值（酶标板读数）

表A.1  各标准品与样本孔OD值

标准品（单孔）：

组别	OD值
标准品S5（ 12 nmol/L )	0.0369
标准品S4（6 nmol/L )	0.1630
标准品S3（3 nmol/L )	0.2643
标准品S2（ 1.5 nmol/L )	0.3648
标准品S1（0.75 nmol/ L）	0.7396
标准品S0（0 nmol/L )	1.5509

样本（每时间点6孔，对应6只动物）：

组别	动物1	动物2	动物3	动物4	动物5	动物6
0 min	0.6230	0.6145	0.5687	0.6015	0.6233	0.6462
5 min	0.5596	0.4837	0.5061	0.5454	0.4912	0.5584
15 min	0.4157	0.4597	0.4309	0.4563	0.4176	0.4755
30 min	0.2766	0.3421	0.3303	0.3185	0.3577	0.3465
1 h	0.4006	0.3568	0.3539	0.3504	0.3804	0.3454
2 h	0.3856	0.4148	0.4403	0.3467	0.4468	0.4726
4 h	0.4318	0.4788	0.4420	0.4504	0.4330	0.4540
8 h	0.5511	0.4533	0.4869	0.4927	0.4857	0.5024
12 h	0.6052	0.5252	0.5083	0.5066	0.5737	0.5748

注：OD值为酶标分析仪Infinite F50在竞争法cAMP ELISA检测中的原始读数。

-----------报告结束-----------

以下为检测报告截图